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作为《小马宝莉：彩虹摇滚》的续集，本片的故事背景依旧设定在和小马利亚平行的人类世界里的坎特洛特高中，值得一提的是，来自人类世界的紫悦将在此片中首次登场。
每隔四年，坎特洛特高中和水晶预科学院会联合举办“友谊大赛”：在两校学生之间开展各项学科竞赛，而坎特洛特高中每回都败北。新一轮的友谊大赛开赛在即，柔柔、云宝、碧琪、苹果嘉儿、珍奇以及余晖烁烁卯足了劲想办法赢得比赛，却意外地发现紫悦出现在竞争对手的队伍中……。这是一部直面生死的爱情绝唱，一对同父异母姐妹血肉互献的爱的礼赞，更是一个年轻母亲以生命抒写伟大母爱的动人颂歌。 姐姐得了白血病，从小被父亲抛弃的妹妹不记仇隙，献上自己的骨髓。姐姐得救，她的恋人却爱上妹妹。姐姐把隐痛埋在心底，在妹妹遭遇车祸失去生育功能后，她以自己的卵巢帮助妹妹重做一个女人和母亲。妹妹怀孕后又得绝症，为了孩子，也为了她刻骨铭心的爱的结晶，她用自己的死为孩子打开新生命的通道。爱情、亲情、友情从这对姐妹的磨难中回到各色人等的心间，生离死别的打击面前，是超越私利的人间真情和无私的奉献。爱，因此强大，生命，因此而崇高无畏。。